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科研ELISA試劑盒是干什么用的,又該怎么用呢?

更新時(shí)間:2020-07-21      瀏覽次數(shù):1852
   科研ELISA試劑盒即酶聯(lián)吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。Engvall 和Perlmann于1971年應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測(cè)定,并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
  科研ELISA試劑盒免疫測(cè)定的目的:
  1.測(cè)定體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等;
  2.測(cè)定激素,包括小分子量的甾體激素等;
  3.測(cè)定抗生素和藥物;
  4.測(cè)定病原體抗原,HBsAg、HBeAg等;
  5.利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等;
  ELISA的基本原理
 ?、偈箍乖ɑ蚩贵w)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性;
  ②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原(或抗體),而且此酶標(biāo)抗原(或抗體)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;
 ?、蹨y(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本(抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng),再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應(yīng)底物后,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析,以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量。
  科研ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在中 除正常反應(yīng)外,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果)。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。
  科研ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
  1.包被;
  2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔);
  3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
  4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘;
  5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml;
  6.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。
  血清是ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。
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