Gibco胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
Gibco胎牛血清操作步驟:
血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑。常用血清是胎牛血清(FBS),也稱FCS。胎牛血清是從適合人類衛(wèi)生習(xí)慣的農(nóng)場收集的。有時,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分,培養(yǎng)細(xì)胞的類型和培養(yǎng)體系而定。
1、采集
在胎牛血清生產(chǎn)過程中,全血使用無菌一次性塑料袋收集,待凝結(jié)后分離,收集和冷凍儲存血清??刂铺ヅQ宓某跏际占强刂平K血清產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素。只有初始原料符合我們的規(guī)范時才能允許生產(chǎn)。
2、血清原料
在市場存在兩個胎牛血清標(biāo)準(zhǔn):美國農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)(USDA)和歐洲標(biāo)準(zhǔn)。美國農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn),原始血清必須采自未發(fā)生瘋牛?。˙SE)和口蹄疫(FMD)疫情的國家,才可自由進(jìn)口到任何國家,用于安全生產(chǎn)。而且研究者只有使用符合這種標(biāo)準(zhǔn)的血清,才被允許將其細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)品送至其他同樣有嚴(yán)格進(jìn)口條款的國家,進(jìn)行合作交流。
3、處理過程
優(yōu)選數(shù)個批次凍存血清進(jìn)行解凍,檢驗其內(nèi)毒素和血紅素的含量,滿足標(biāo)準(zhǔn)的才能在冷藏條件下充分混合繼續(xù)加工,進(jìn)一步進(jìn)行過濾除菌。NQBB依次通過預(yù)過濾和膜過濾來處理胎牛血清。后的過濾步驟為連續(xù)三次用100nm的濾膜過濾。過濾結(jié)束,血清采用無菌工藝進(jìn)行分裝,整個過程有效確保終產(chǎn)品無菌。血清生產(chǎn)的空氣潔凈度為100級。所有分裝工作臺都通過高效微??諝膺^濾器過濾,并保持正壓分裝環(huán)境,對總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進(jìn)行監(jiān)控。分裝后,終產(chǎn)品迅速-20度凍存,并隔離,直到所有的質(zhì)量控制檢測完成。
4、FBS質(zhì)量控制
每批胎牛血清檢測確認(rèn)符合各項標(biāo)準(zhǔn),并以書面的方式記錄在質(zhì)檢報告中。
5、質(zhì)量保證
胎牛血清生產(chǎn)過程在一個嚴(yán)格控制的條件下進(jìn)行。紫外線滅菌,過濾除菌和分裝是關(guān)鍵生產(chǎn)環(huán)節(jié),可以確保血清的品質(zhì)。與血清生產(chǎn)相關(guān)的數(shù)據(jù)作為專門的檔案記錄,從初步采集的原料到成品儲存的整個生產(chǎn)過程,以及質(zhì)量控制檢測和結(jié)果都有備案,并可以在監(jiān)控條件下追溯源文件。 胎牛血清生產(chǎn)過程遵循歐洲議會關(guān)于體外診斷的標(biāo)準(zhǔn)。