植物Elisa試劑盒的特異性好,大大降低了檢測(cè)的假陽性,靈敏度高,采用靈敏的熒光檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,操作簡單,無PCR產(chǎn)物污染。省去了麻煩的基因序列查詢、引物探針設(shè)計(jì)、PCR擴(kuò)增條件優(yōu)化等大量費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、費(fèi)錢的繁瑣工作。
植物Elisa試劑盒的兩種檢測(cè)模式:
交探針模式(Beacon):分子信標(biāo)是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),因此標(biāo)記在一端的熒光基團(tuán)與標(biāo)記在另一端的淬滅基團(tuán)緊緊靠近。熒光基團(tuán)被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅,由熒光基團(tuán)產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標(biāo)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中,環(huán)一般為15-30個(gè)核苷酸長,并與目標(biāo)序列互補(bǔ);莖一般5-7個(gè)核苷酸長,并相互配對(duì)形成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的一端,而淬滅劑則標(biāo)記在另一端。在復(fù)性溫度下,因?yàn)槟0宀淮嬖跁r(shí)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu),當(dāng)加熱變性會(huì)互補(bǔ)配對(duì)的莖環(huán)雙鏈解開,如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對(duì)。與模板配對(duì)后,分子信標(biāo)將成鏈狀而非發(fā)夾狀,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分開。當(dāng)熒光基團(tuán)被激發(fā)時(shí),因淬滅作用被解除,發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在,分子信標(biāo)也是積累熒光。
植物Elisa試劑盒的通用規(guī)則:
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,過失不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確認(rèn)。但有專業(yè)人員進(jìn)行糾正。
2、要配備20ul、50ul、00ul、000ul和排槍各一支。羅致不同的液體后,要更換槍頭。即使是羅致標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
3、要在實(shí)驗(yàn)前小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復(fù)到室溫,以使成果更安穩(wěn)。
4、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
5、用槍羅致液體時(shí)速度不能太快,避免產(chǎn)生氣泡而使羅致量不準(zhǔn)確。
6、羅致液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少過失。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體觸摸,可使槍頭上的液滴和孔壁觸摸,液滴會(huì)天然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行悄悄晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功用。